近日，國(guó)際學(xué)術(shù)期刊Journal of the American Chemical Society在線發(fā)表了華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院、動(dòng)物醫(yī)學(xué)院位燈國(guó)教授團(tuán)隊(duì)和英國(guó)倫敦大學(xué)學(xué)院（UCL）藥學(xué)院Shozeb Haider教授合作研究成果，題為“Mechanistic Insights into the Ligand-Induced Unfolding of an RNA G-Quadruplex”。通過計(jì)算模擬結(jié)合生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，揭示了卟啉化合物TMPyP4破壞RNA G-四鏈體結(jié)構(gòu)的機(jī)制；為研究G-四鏈體與配體互作以及靶向RNA G-四鏈體的去穩(wěn)定劑設(shè)計(jì)提供了新思路。   　　G-四鏈體是由鳥嘌呤富集序列折疊成的特殊核酸結(jié)構(gòu)，它的形成會(huì)影響基因復(fù)制、轉(zhuǎn)錄以及翻譯等過程。加入小分子破壞特定G-四鏈體的結(jié)構(gòu)，可簡(jiǎn)單快捷地降低其對(duì)生物過程的干擾。然而，目前，破壞G-四鏈體結(jié)構(gòu)的小分子只是在實(shí)驗(yàn)中偶然篩選到的（如，TMPyP4）。我們對(duì)小分子破壞其結(jié)構(gòu)的作用機(jī)制知之甚少，無法靶向特定G-四鏈體結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)專一性的去穩(wěn)定劑。為開發(fā)反向驗(yàn)證G-四鏈體功能的小分子工具，揭示G-四鏈體結(jié)構(gòu)去穩(wěn)定劑作用機(jī)制、發(fā)展設(shè)計(jì)方法，顯得非常有必要。     　　圖 1 TMPyP4破壞G-四鏈體結(jié)構(gòu)機(jī)制   　　前期，位燈國(guó)教授團(tuán)隊(duì)在偽狂犬病毒唯一立即早期基因IE180 3' UTR區(qū)域鑒定出一段促進(jìn)IE180表達(dá)和病毒增殖的RNA G-四鏈體可形成序列，發(fā)現(xiàn)TMPyP4破壞該G-四鏈體結(jié)構(gòu)，并對(duì)病毒呈現(xiàn)了明顯的抑制效果（RNA Biology，2020）；通過單波長(zhǎng)反常散射解析了TMPyP4與RNA G-四鏈體的兩個(gè)復(fù)合物結(jié)構(gòu)（Nucleic Acids Research, 2020）。   　　基于復(fù)合物結(jié)構(gòu)以及生物物理實(shí)驗(yàn)，團(tuán)隊(duì)成員猜測(cè)小分子與G-四鏈體的兩個(gè)復(fù)合物結(jié)構(gòu)可能是小分子破壞G-四鏈體過程中存在的兩個(gè)狀態(tài)，便采用增強(qiáng)采樣的分子動(dòng)力學(xué)模擬，發(fā)現(xiàn)小分子TMPyP4在解開G-四鏈體結(jié)構(gòu)之前，先與G-四鏈體結(jié)合，經(jīng)過loop 區(qū)的引導(dǎo)，小分子在G-quartet表面（四個(gè)鳥嘌呤通過氫鍵組成的平面）振動(dòng)，在groove 中滑動(dòng)，最后促成G-四鏈體結(jié)構(gòu)的解鏈。小分子斜插在groove 和G-quartet交界處的構(gòu)象是促成G-四鏈體的解開的一個(gè)關(guān)鍵狀態(tài)。   　　該工作將計(jì)算模擬與生化實(shí)驗(yàn)分析相結(jié)合，揭示小分子改變G-四鏈體構(gòu)象的動(dòng)態(tài)轉(zhuǎn)變機(jī)制。基于轉(zhuǎn)變的關(guān)鍵狀態(tài)，有望設(shè)計(jì)出高選擇性的G-四鏈體去穩(wěn)定劑。該工作為G-四鏈體功能研究或者以G-四鏈體為靶點(diǎn)的抗病毒藥物分子設(shè)計(jì)提供新思路。   　　英國(guó)布里斯托爾大學(xué)Susanta Haldar博士和華中農(nóng)業(yè)大學(xué)張雅姝博士為論文的第一作者，華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)科、動(dòng)醫(yī)學(xué)院位燈國(guó)教授和倫敦大學(xué)學(xué)院藥學(xué)院Shozeb Haider教授為通訊作者。本研究得到國(guó)家自然科學(xué)基金、中央高校基本科研經(jīng)費(fèi)等項(xiàng)目資助。   　　【英文摘要】   　　The cationic porphyrin TMPyP4 is a well-established DNA G-quadruplex （G4） binding ligand that can stabilize different topologies via multiple binding modes. However, TMPyP4 can have both a stabilizing and destabilizing effect on RNA G4 structures. The structural mechanisms that mediate RNA G4 unfolding remain unknown. Here, we report on the TMPyP4-induced RNA G4 unfolding mechanism studied by well-tempered metadynamics （WT-metaD） with supporting biophysical experiments. The simulations predict a two-state mechanism of TMPyP4 interaction via a groove-bound and a top-face-bound conformation. The dynamics of TMPyP4 stacking on the top tetrad disrupts Hoogsteen H-bonds between guanine bases, resulting in the consecutive TMPyP4 intercalation from top-to-bottom G-tetrads. The results reveal a striking correlation between computational and experimental approaches and validate WT-metaD simulations as a powerful tool for studying RNA G4–ligand interactions.   　　原文鏈接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/jacs.1c11248